استخراج DNA از نمونه هاي گياهي

گاردینا

عضو جدید
حدود 3/-5/ گرم بافت گياهي در ازت مايع به صورت پودر در آمده و به میکروتیوب های 5/1 ميلي ليتري منتقل شدند. سپس 700 ميكروليتر بافر CTAB 2 درصد (2% CTAB, 100 mM Tris-HCl, 20 mM EDTA, 1.4 M NaCl, PVP 1%, pH 8.0) با دمايC °65-60 به همراه 5 ميكروليتر 2- مركاپتواتانول به هر نمونه در میکروتیوب ها اضافه و در بن ماری به مدت 60-30 دقيقه در دماي
C °65 قرار داده شد. در مرحله بعد، به هر لوله 700 ميكروليتر مخلوط كلروفرم - ايزوآميل الكل ( به نسبت حجمي 24 به 1) اضافه و در 12000 دور در دقيقه به مدت 10 دقيقه سانتريفوژ شدند. براي رسوب دادن DNA كل، 600 ميكروليتر از رونشين هر لوله را بدقت برداشته و به يك لوله اپندروف ديگر منتقل و پس از اضافه كردن 400 ميكروليتر ايزوپروپانول با دماي C °20- به هر كدام از آن ها، به مدت 30 دقيقه در فريزر در اين دما نگهداري شدند. سپس محتوي لوله ها را به مدت 10 دقيقه در 13000 دور در دقيقه سانتيريفوژ كرديم. رونشین را به آرامی دور ریخته و به رسوب حاصل 100 میکرولیتر اتانول 70 درصد اضافه کرده و 3 دقیقه در 5000 دور در دقيقه سانتریفوژ شد. این عمل سه بار تکرار گردید و بعد از آن لوله ها از باقیمانده الکل خشك و در 100 ميكروليتر آب مقطر سترون و یا در 100 ميكروليتر بافر TE ((10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0 حل و بعنوان DNA قالب در PCR استفاده شد.
 

آگرونومیست

عضو جدید
عالی بود. تشکر میکنم چونکه دکمه تشکر رو نتونستم پیدا کنم.
فقط نام این متد رو هم بنویسید.
 
Similar threads

Similar threads

بالا